«Трансфер Фактор» в онкологии: цитотоксический тест

 

М.В. Киселевским и Е.О. Халтуриной (Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН) был проведен цитотоксический тест. Исследование проходило на лимфоцитах здоровых доноров (донорский пункт РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН). Мононуклеарные клетки (МНК), выделенные в градиенте плотности фикола-урографина (1,077 г/см³), были внесены в лунки 96-луночного микропланшета Costar в числе 60 тыс. на 1 лунку в 100 мкл культуральной среды.
В лунки были добавлены исследуемые вещества (I, A, B, G, J). Концентрации этих веществ составили (соответственно): 1 мг/мл, 0,1 мг/мл, 0,001 мг/мл., 0,0001 мг/мл, 0,00001 мг/мл. Затем, в течение 24 и 48 часов, в условиях инкубатора-CO2, при атмосфере 5% CO2, t0 370С и влажности в 100%, проводили инкубацию. После ее завершения в лунки были внесены опухолевые клетки (эритробластный лейкоз человека – линия К-562) в числе 30 тыс. на 1 лунку. Клетки-мишени и клетки-эффекторы соотносились как 2:1.  Варианты исследования были протестированы триплетно.

 

Цитотоксический тест:

МТТ-методика выявления жизнестойкости клеточной культуры состоит в способности клеток к трансформации растворимого желтого бромида 3(4,5-диметилтиазол-2)-2,5-тетразолия (МТТ) в нерастворимые сине-пурпурные внутриклеточные кристаллы МТТ-формазана (МТТ-ф). Известно, что данной способностью не обладают нежизнеспособные мертвые клетки. Активность процесса трансформации МТТ в МТТ-ф показывает уровень дегидрогеназной деятельности изучаемых клеток, а также формируется интенсивностью совокупных ферментных систем.

На основе солевого раствора Хенкса был приготовлен раствор МТТ (в концентрации 5 мг/мл).

По завершении процесса инкубации клеток-мишеней и клеток-эффекторов в каждую лунку микропланшета внесли рабочий раствор МТТ (по 20 мкл). Затем произвели инкубацию в СО2-инкубаторе (18-24 ч. при температуре 370С, 100% влажности, в атмосфере 5% СО2). После чего был удален супернатант и в каждую лунку добавили диметилсульоксид, «Serva» (ДМСО) - по 150 мкл. Спустя полчаса после инкубации при комнатной t0, после окончательного растворения кристаллов формазана, была установлена оптическая плотность состава лунок на мульти-луночном спектрографе «MultiScan MCC 340», Labsystem (длина волны – 540 нм.).
Для расчета цитотоксического индекса (ЦИ) применялась стандартная формула:

ЦИ (%) = [1-(ОПэ+м-ОПэ)/ОПм]*100,

Где:
ОПэ+м – оптическая плотность в опытных сериях;

ОПэ – оптическая плотность в лунках с клетками-эффекторами;

ОПм – оптическая плотность в лунках с клетками-мишенями.

 

Результаты исследования представлены в Таблице 1.

Таблица 1

Цитотоксический индекс (%)

Как видно из Таблицы №1, все исследуемые вещества оказывают стимулирующее влияние на цитотоксическую и противоопухолевую активность лимфоцитов здоровых доноров при тестировании на НК-чувствительной линии опухолевых клеток линии К-562.

Максимальное стимулирующее воздействие наблюдается спустя 48 ч. Наибольшей эффективностью обладает диапазон воздействующих концентраций в пределах от 0,1 до 0,0001 мг/мл. Самыми эффективными среди исследуемых веществ оказались B и G, которые заметно усилили киллерное действие мононуклеарных клеток спустя 48 часов после инкубации. Их активность повлекла лизис 80-99% опухолевых клеток.

В контрольной серии тестов цитотоксическое действие на опухолевые клетки в установленном концентрационном диапазоне выявить не удалось.

Спонтанная цитотоксическая активность не стимулированных мононуклеаров = 18±6%.

Заключение:
Проведенное исследование показало, что тестируемые вещества характеризуются стимулирующим воздействием на противоопухолевую и цитотоксическую активность клеток-мононуклеаров крови здоровых доноров. Максимальный эффект достигается спустя 48 часов после инкубации мононуклеаров с разными концентрациями исследуемых веществ. 0,1 – 0,0001 мг/мл – установлен как оптимальный диапазон воздействующих концентраций. Соединения B и G обладают наиболее стимулирующим свойством. Инкубация с данными веществами увеличивает цитотоксичность мононуклеаров от 18±6% до 80-99%. Следовательно, препарат "Трансфер Фактор Плюс" рекомендуется к применению в составе противоопухолевой терапии.

Отзывов: 0
Ваше Имя:


Ваш отзыв:
Последние Статьи
Доставка "Трансфер Фактора" в период новогодних каникул
    Поздравляем Вас, дорогие покупатели, с наступающим Новым годом! Препараты & ...»
Лекция профессора Дадали В.А. о препарате "Трансфер Фактор"
    Предлагаем вашему вниманию лекцию заведующего кафедрой биохимии Санкт-Петерб ...»
4Life награждена за совместные инновации
    Крупный производитель сырья из биологических ингредиентов – компания E ...»
Популярные Статьи
     В,Ф. .Лапшин, д.м.н., профессор, заведующий отделом проблем аллергии и ...»
Орловская С.П., Гинько З.И., Стрельцова Г.П. ГУ Новосибирский областной центр по профилактике и б ...»

Отзывы о магазине

Заказывала в магазине уже 2 раза. Привозят на следующий день в заданное время. Отдельное спасибо девушке-консультанту Ольге, я долго терзала по поводу выбора трансфера. Спасибо большое за качественный сервис!

Наталья, СПб

Всегда покупаю только здесь. Очень внимательные продавцы, удобная форма заказа, быстрая доставка, к тому же бесплатная. Есть оповещение по СМС. Спасибо вам, буду и дальше заказывать.

Игорь, Псков