«Трансфер Фактор» в онкологии: цитотоксический тест

 

М.В. Киселевским и Е.О. Халтуриной (Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН) был проведен цитотоксический тест. Исследование проходило на лимфоцитах здоровых доноров (донорский пункт РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН). Мононуклеарные клетки (МНК), выделенные в градиенте плотности фикола-урографина (1,077 г/см³), были внесены в лунки 96-луночного микропланшета Costar в числе 60 тыс. на 1 лунку в 100 мкл культуральной среды.
В лунки были добавлены исследуемые вещества (I, A, B, G, J). Концентрации этих веществ составили (соответственно): 1 мг/мл, 0,1 мг/мл, 0,001 мг/мл., 0,0001 мг/мл, 0,00001 мг/мл. Затем, в течение 24 и 48 часов, в условиях инкубатора-CO2, при атмосфере 5% CO2, t0 370С и влажности в 100%, проводили инкубацию. После ее завершения в лунки были внесены опухолевые клетки (эритробластный лейкоз человека – линия К-562) в числе 30 тыс. на 1 лунку. Клетки-мишени и клетки-эффекторы соотносились как 2:1.  Варианты исследования были протестированы триплетно.

 

Цитотоксический тест:

МТТ-методика выявления жизнестойкости клеточной культуры состоит в способности клеток к трансформации растворимого желтого бромида 3(4,5-диметилтиазол-2)-2,5-тетразолия (МТТ) в нерастворимые сине-пурпурные внутриклеточные кристаллы МТТ-формазана (МТТ-ф). Известно, что данной способностью не обладают нежизнеспособные мертвые клетки. Активность процесса трансформации МТТ в МТТ-ф показывает уровень дегидрогеназной деятельности изучаемых клеток, а также формируется интенсивностью совокупных ферментных систем.

На основе солевого раствора Хенкса был приготовлен раствор МТТ (в концентрации 5 мг/мл).

По завершении процесса инкубации клеток-мишеней и клеток-эффекторов в каждую лунку микропланшета внесли рабочий раствор МТТ (по 20 мкл). Затем произвели инкубацию в СО2-инкубаторе (18-24 ч. при температуре 370С, 100% влажности, в атмосфере 5% СО2). После чего был удален супернатант и в каждую лунку добавили диметилсульоксид, «Serva» (ДМСО) - по 150 мкл. Спустя полчаса после инкубации при комнатной t0, после окончательного растворения кристаллов формазана, была установлена оптическая плотность состава лунок на мульти-луночном спектрографе «MultiScan MCC 340», Labsystem (длина волны – 540 нм.).
Для расчета цитотоксического индекса (ЦИ) применялась стандартная формула:

ЦИ (%) = [1-(ОПэ+м-ОПэ)/ОПм]*100,

Где:
ОПэ+м – оптическая плотность в опытных сериях;

ОПэ – оптическая плотность в лунках с клетками-эффекторами;

ОПм – оптическая плотность в лунках с клетками-мишенями.

 

Результаты исследования представлены в Таблице 1.

Таблица 1

Цитотоксический индекс (%)

Как видно из Таблицы №1, все исследуемые вещества оказывают стимулирующее влияние на цитотоксическую и противоопухолевую активность лимфоцитов здоровых доноров при тестировании на НК-чувствительной линии опухолевых клеток линии К-562.

Максимальное стимулирующее воздействие наблюдается спустя 48 ч. Наибольшей эффективностью обладает диапазон воздействующих концентраций в пределах от 0,1 до 0,0001 мг/мл. Самыми эффективными среди исследуемых веществ оказались B и G, которые заметно усилили киллерное действие мононуклеарных клеток спустя 48 часов после инкубации. Их активность повлекла лизис 80-99% опухолевых клеток.

В контрольной серии тестов цитотоксическое действие на опухолевые клетки в установленном концентрационном диапазоне выявить не удалось.

Спонтанная цитотоксическая активность не стимулированных мононуклеаров = 18±6%.

Заключение:
Проведенное исследование показало, что тестируемые вещества характеризуются стимулирующим воздействием на противоопухолевую и цитотоксическую активность клеток-мононуклеаров крови здоровых доноров. Максимальный эффект достигается спустя 48 часов после инкубации мононуклеаров с разными концентрациями исследуемых веществ. 0,1 – 0,0001 мг/мл – установлен как оптимальный диапазон воздействующих концентраций. Соединения B и G обладают наиболее стимулирующим свойством. Инкубация с данными веществами увеличивает цитотоксичность мононуклеаров от 18±6% до 80-99%. Следовательно, препарат "Трансфер Фактор Плюс" рекомендуется к применению в составе противоопухолевой терапии.

Отзывов: 0
Ваше Имя:


Ваш отзыв:
Последние Статьи
Назначен новый вице-президент по разработке продукции 4Life
    Летом 2018 года руководство 4Life Research объявило о новом назначении &ndas ...»
Национальная конвенция 4Life Research прошла в Таиланде
    Компания 4Life провела национальную конвенцию «Живи по-новому», ...»
Сотрудники 4Life Research совершили тур по городам рынка Евразии
    В августе команда корпоративного офиса компании 4Life Research из США заверш ...»
Популярные Статьи
Киселевский М.В., Халтурина Е.О.   Отчет Лаборатория клеточного иммунитета Российского ...»
Орловская С.П., Гинько З.И., Стрельцова Г.П. ГУ Новосибирский областной центр по профилактике и б ...»
     В,Ф. .Лапшин, д.м.н., профессор, заведующий отделом проблем аллергии и ...»